Potencial antimicrobiano y crecimiento de células osteoblásticas en superficies de titanio modificadas electroquímicamente con nanotubos e incorporación de selenio o plata

Scientific Reports volumen 12, Número de artículo: 8298 (2022) Citar este artículo

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Las superficies de nanotubos de titanio que contienen plata, zinc y cobre han mostrado efectos antimicrobianos sin disminuir el crecimiento de células osteoblásticas. En este estudio in vitro presentamos los primeros resultados sobre la evaluación biológica de las modificaciones superficiales mediante la incorporación de compuestos de selenio y plata en nanotubos de dióxido de titanio (TiO2) mediante deposición electroquímica. Se cultivaron nanotubos de TiO2 (TNT) y TNT dopado con fosfato (pTNT) en la superficie de discos de Ti6Al4V mediante anodización. Los compuestos de hidroxiapatita (HA), selenio (Se) y plata (Ag) se incorporaron por deposición electroquímica. Las unidades formadoras de colonias de Staphylococcus epidermidis (DSM 3269) se redujeron significativamente en SepTNT (0,97 ± 0,18 × 106 CFU/mL), SepTNT-HA (1,2 ± 0,39 × 106 CFU/mL), AgpTNT (1,36 ± 0,42 × 106 CFU/mL) ) y Ag2SepTNT (0,999 ± 0,12 × 106 CFU/mL) en comparación con el control no modificado (2,2 ± 0,21 × 106 CFU/mL). La adhesión bacteriana se calculó midiendo el área cubierta después de la tinción con fluorescencia. La adherencia fue menor en SepTNT (37,93 ± 12 %; P = 0,004), pTNT (47,3 ± 6,3 %, P = 0,04), AgpTNT (24,9 ± 1,8 %; P < 0,001) y Ag2SepTNT (14,9 ± 4,9 %; P < 0,001 ) en comparación con el control no modificado (73,7 ± 11%). Se observó la formación de biopelículas y el crecimiento de células osteoblásticas (MG-63) mediante tinción con cristal violeta. La formación de biopelículas se redujo en los discos SepTNT (22 ± 3 %, P = 0,02) y Ag2SepTNT (23 ± 11 %, P = 0,02) en comparación con el control no modificado (54 ± 8 %). En comparación con el control no modificado, las superficies SepTNT-HA y pTNT modificadas mostraron un área cubierta significativamente mayor con células MG-63 osteoblásticas. Las imágenes del microscopio electrónico de barrido (SEM) confirmaron los hallazgos relacionados con el crecimiento de células bacterianas y osteoblásticas. Estos hallazgos muestran un posible efecto sinérgico al combinar selenio y plata con nanotubos de titanio.

La infección articular periprotésica (IAP) sigue siendo una de las complicaciones más desafiantes después de la artroplastia articular total (AT), con un impacto dramático en la morbilidad y mortalidad de los pacientes, así como una carga socioeconómica para el sistema de salud pública1,2,3. ,4,5,6.

Debido a un aumento continuo en la resistencia a los antibióticos, se han hecho muchos esfuerzos para nuevos enfoques terapéuticos antimicrobianos7. La formación de nanotubos de dióxido de titanio (TiO2) (TNT) ya ha llamado la atención debido a su potencial antibacteriano y osteointegrador en superficies ortopédicas relevantes8,9,10. Se ha propuesto que el TNT reduce las bacterias en las superficies de titanio al inhibir la adhesión bacteriana. Esto se puede lograr debido a una mayor hidrofilia y una aglomeración deteriorada de las células bacterianas debido a la estructura tubular del TNT11. Otra opción es aplicar un recubrimiento con propiedades bactericidas en la superficie del implante. Se ha investigado el uso de iones que matan bacterias como plata12,13,14,15,16, zinc17 o selenio18,19,20,21,22 y los implantes recubiertos de plata ya están disponibles comercialmente. Además, a diferencia del mecanismo antibacteriano de TNT, estos metales matan las células bacterianas mediante la liberación de iones10. Este efecto puede incrementarse mediante el uso de nanopartículas de estos metales10. Además, se ha demostrado que el uso de TNT mejora el potencial osteogénico23, lo que también podría reportarse para el selenio21,24. Sin embargo, existe alguna evidencia de que los compuestos de plata podrían influir negativamente en la osteogénesis debido a los efectos citotóxicos25. Por lo tanto, incluso si algunos estudios retrospectivos pudieran mostrar una disminución de la IAP en pacientes de alto riesgo, no hay suficiente evidencia en este momento para respaldar el uso global de iones de plata en pacientes con artroplastia regular26. Un estudio de Holinka et al.27 reveló una disminución del crecimiento de células bacterianas y la formación de biopelículas de Staphylococcus aureus y Staphylococcus epidermidis (S. epidermidis) cuando se usa selenio. Sin embargo, el uso de mecanismos de dopaje/remojo para incorporar selenio en la superficie nanoestructurada hace que la deposición de selenio sea menos controlable. La hidroxiapatita (HA) es uno de los aditivos más utilizados en los implantes no cementados. El mineral inorgánico que consiste en un compuesto de hidróxido de fosfato de calcio representa el estándar de oro para los agentes osteoinductivos.

Con el uso de anodización, nuestro grupo de estudio pudo desarrollar una estrategia para formar TNT de forma uniforme. Además, la deposición electroquímica permitió la incorporación de partículas (metales puros o compuestos de los mismos) y otros agentes beneficiosos (por ejemplo, HA) en/sobre los nanotubos para mejorar eventualmente el potencial antimicrobiano y osteointegrador28,29. Además, pudimos crear TNT con un ancho deseado de 100 nm para proporcionar propiedades antibacterianas y de osteointegración y proporcionar espacio suficiente para la deposición de agentes antimicrobianos en los nanotubos. Este método permite la combinación de diferentes composiciones antimicrobianas para mejorar los efectos antimicrobianos y osteointegradores sinérgicos. El presente estudio tuvo como objetivo investigar los efectos antimicrobianos de las superficies recién formadas y evaluar el crecimiento de células osteoblásticas en un estudio in vitro. Comparamos la adhesión bacteriana, la formación de biopelículas y el crecimiento de células osteoblásticas de nanotubos de TiO2 dopados con selenio y plata con superficies regulares de titanio y nanotubos de TiO2 dopados con HA.

Las superficies de los discos de titanio con modificaciones en términos de TNT y pTNT y la deposición electroquímica adicional de Se, Ag y HA se investigaron más a fondo con respecto a las características de la superficie. El análisis de la composición elemental por EDX mostró una cantidad de Se en las superficies de los discos SepTNT y SepTNT-HA de un % en peso medio de 29,9 ± 6,4 % en peso. La cantidad media de Se y Ag en las superficies de los discos de Ag2SepTNT fue del 17,8 ± 5,4 % en peso y del 18,8 ± 9,4 % en peso, respectivamente. El % en peso medio de Ag en las superficies de los discos de Ag-pTNT fue de 6 ± 2 % en peso. La visualización de la superficie de los discos se realizó mediante microscopía electrónica de barrido (SEM; ZEISS SIGMA HD VP) equipada con una fuente de emisión de campo Schottky para una mayor resolución espacial (Fig. 1). Ya se ha publicado28 más información sobre las características y propiedades de la superficie de la presente modificación de la superficie.

Imágenes de microscopio electrónico de barrido (SEM) de las superficies de los discos: (A) control no modificado; (B) nanotubos de titanio dopados con fosfato (pTNT); (C) nanotubos de TiO2 dopados con fosfato incorporado con selenio (SepTNT); (D) nanotubos de TiO2 dopados con fosfato revestidos con hidroxiapatita (HA); (E) nanotubos de TiO2 dopados con fosfato incorporados con selenio con revestimiento de hidroxiapatita (SepTNT-HA); (F) nanotubos de TiO2 dopados con fosfato incorporados con selenio y plata (Ag2SepTNT).

Después de incubar las muestras con S. epidermidis y sonicar para separar las células bacterianas, se evaluaron las CFU/mL en placas de agar. Se pudo detectar un recuento de células bacterianas significativamente menor para SepTNT (0,97 ± 0,18 × 106 CFU/mL; P = 0,001), SepTNT-HA (1,2 ± 0,39 × 106 CFU/mL; P = 0,001), AgpTNT (1,36 ± 0,42 × 106 CFU/mL; P = 0,002) y Ag2SepTNT (0,999 ± 0,12 × 106 CFU/mL; P = 0,001) en comparación con el control no modificado (2,2 ± 0,21 × 106 CFU/mL). La Figura 2 abarca todos los experimentos bacterianos (CFU, Biofilm y tinción de fluorescencia) de este estudio. La figura 3 muestra los resultados del experimento de recuento de UFC. La adhesión celular bacteriana fue significativamente menor en SepTNT (38 ± 12 %; P = 0,004), pTNT (47 ± 6 %, P = 0,040), AgpTNT (25 ± 2 %; P < 0,001) y Ag2SepTNT (15 ± 5 %; P < 0,001) en comparación con el control no modificado (74 ± 11%). Las imágenes SEM reflejan los resultados de los experimentos de conteo bacteriano. En la Fig. 4 se pueden encontrar ejemplos de imágenes SEM. Las imágenes SEM con recubrimiento de Ag (AgpTNT y Ag2SepTNT) muestran una incorporación de partículas de plata y plata-selenio con un mayor número de células bacterianas en la superficie que en la CFU. contar. Sin embargo, las células con partículas ingeridas parecían no ser viables (Fig. 4).

Adhesión de células bacterianas y formación de biopelículas: Se evaluó el recuento de células bacterianas (parte superior izquierda) cultivando S. epidermidis en los discos modificados. Después de la incubación, los discos se sonicaron y el sobrenadante se transfirió a placas de agar y se cultivó durante la noche. Las UFC/ml se evaluaron contando las células con un software de procesamiento de imágenes. Formación de biopelículas en discos de titanio después de la incubación con S. epidermidis y tinción con cristal violeta (arriba a la derecha). El biofilm se midió analizando el área cubierta con un software de procesamiento de imágenes. La adhesión de las células bacterianas se midió después de la tinción de fluorescencia con SYTO 9 (imagen inferior) calculando el área cubierta. Los discos modificados con selenio y plata exhibieron una clara reducción en la adhesión de células bacterianas y la formación de biopelículas. (A) control no modificado; (B) nanotubos de titanio dopados con fosfato (pTNT); (C) nanotubos de TiO2 dopados con fosfato incorporado con selenio (SepTNT); (D) nanotubos de TiO2 dopados con fosfato revestidos con hidroxiapatita (HA); (E) nanotubos de TiO2 dopados con fosfato incorporados con selenio con revestimiento de hidroxiapatita (SepTNT-HA); (F) nanotubos de TiO2 dopados con fosfato incorporados con plata/selenio (Ag2SepTNT).

Unidades formadoras de colonias de S. epidermidis tras 24 h de incubación sobre la superficie de los discos de titanio modificados y no modificados (control) (*P < 0,05). nanotubos de TiO2 dopados con fosfato incorporados con selenio (SepTNT), nanotubos de TiO2 dopados con fosfato incorporados con selenio con revestimiento de hidroxiapatita (SepTNT-HA), nanotubos de TiO2 dopados con fosfato (pTNT), nanotubos de titanio (TNT), fosfato de titanio incorporado con plata nanotubos de TiO2 dopados (AgpTNT), nanotubos de TiO2 dopados con plata y selenio incorporados con fosfato (Ag2SepTNT) y control no modificado (Ti6Al4V).

Imágenes de microscopio electrónico de barrido (SEM) de las superficies de los discos después de 24 h de incubación con S. epidermidis; (A) el control no modificado muestra varias colonias bacterianas; (B) Con el uso de nanotubos de TiO2 dopados con fosfato (pTNT), una tendencia hacia un mayor crecimiento bacteriano; (C) la incorporación adicional de selenio (SepTNT) conduce a una reducción significativa de las colonias bacterianas; (D) el recubrimiento de hidroxiapatita (HA) no fue capaz de reducir el crecimiento bacteriano; (E) en presencia de selenio en combinación con revestimiento de HA se detectó una clara reducción de bacterias; (F) aunque se detectaron distintas colonias bacterianas en la superficie de los nanotubos de TiO2 dopados con fosfato incorporados con plata y selenio (Ag2SepTNT), la mayoría de las bacterias no eran viables y ya habían ingerido partículas de plata y selenio. Sólo eran visibles unas pocas células bacterianas individuales sin ingestión de partículas.

La tinción con Crystal Violet reveló una reducción significativa en la formación de biopelículas con los discos SepTNT- (22 ± 3 %, P = 0,020) y Ag2SepTNT (23 ± 11 %, P = 0,020) en comparación con el control no modificado (54 ± 8 %). Los resultados de la tinción de biopelículas se presentan en la Fig. 5.

Cobertura de biopelícula de discos de titanio modificados y no modificados. Los nanotubos de TiO2 dopados con fosfato incorporados con selenio y plata-selenio (SepTNT, Ag2SepTNT) mostraron una reducción significativa en la formación de biopelículas, mientras que los discos recubiertos de hidroxiapatita con nanotubos de TiO2 dopados con fosfato mostraron una mayor formación de biopelículas en comparación con el control no modificado.

Después de incubar las muestras con células MG63, los discos se tiñeron con cristal violeta para medir el crecimiento de células osteoblásticas. En comparación con el control no modificado, (57 ± 29 %) los discos SepTNT-HA (93 ± 2 %; 0,027) y los discos pTNT (90 ± 4 %, P = 0,040) mostraron un área cubierta significativamente mayor con MG-osteoblástica. 63 celdas. No se pudo detectar ninguna diferencia en el crecimiento de células osteoblásticas en comparación con los discos recubiertos con HA (90 ± 3%). La figura 6 muestra la cobertura con células MG-63 en los discos. Las imágenes SEM de MG-63 en las superficies de titanio se muestran en la Fig. 7.

Crecimiento de células osteoblásticas en discos de titanio modificados y no modificados. Los nanotubos de TiO2 dopados con fosfato incorporados con selenio con recubrimiento de hidroxiapatita (SepTNT-HA) y los nanotubos de TiO2 dopados con fosfato (pTNT) mostraron un aumento significativo en el crecimiento de células osteoblásticas.

Imágenes de microscopio electrónico de barrido (SEM) con dos aumentos diferentes (100 × y 1000x) de las superficies de los discos después de 24 h de incubación con la línea celular osteoblástica MG-63; (A) control no modificado; (B) Las muestras con nanotubos de TiO2 dopados con fosfato (pTNT) parecen tener más células osteoblásticas viables en comparación con el control; (C) la incorporación de selenio (SepTNT) conduce a un aumento significativo en la densidad celular y las aglomeraciones; (D) el recubrimiento de hidroxiapatita (HA) en pTNT mostró más células osteoblásticas pero menos aglomeraciones; (E) el pTNT de selenio en combinación con HA mostró una formación de células osteoblásticas única pero parecía que se detectó menos aglomeración; (F) Ag2SepTNT mostró un menor crecimiento de células osteoblásticas en comparación con SepTNT.

La necesidad de nuevas estrategias terapéuticas para prevenir la IAP se está volviendo más importante a medida que aumenta la incidencia de complicaciones sépticas después de la artroplastia debido a un número creciente de artroplastias de revisión y artroplastias5. Las modificaciones de las superficies de los implantes de titanio para mejorar el potencial antimicrobiano es uno de esos nuevos enfoques preventivos. En este estudio, informamos sobre resultados prometedores con respecto a la reducción del crecimiento de S. epidermidis en superficies de titanio modificadas electroquímicamente mediante el uso de compuestos de plata y selenio junto con la formación de nanotubos de titanio.

Este estudio muestra varias limitaciones y nuestros resultados deben ponerse en perspectiva relativa a estos factores:

Primero, este estudio es un estudio in vitro y solo brinda una confiabilidad limitada para traducir estos hallazgos en el entorno de aplicación clínica real. Especialmente, el potencial osteogénico de las superficies modificadas necesita más análisis en términos de evaluación inmunohistológica y biomecánica en modelos in vivo. Además, para investigar la respuesta del huésped a los implantes modificados, se necesitan estudios en animales para proceder con la traducción a estudios clínicos en humanos. En segundo lugar, debido al alto costo de fabricación de los discos modificados, no pudimos investigar otros patógenos y más puntos de tiempo después de la incubación que podrían haber mostrado resultados diferentes a los descritos en este estudio. En tercer lugar, en un entorno de estudio in vitro no es posible investigar los posibles efectos secundarios debido al recubrimiento de selenio de los discos de titanio. Sin embargo, existen informes sobre el uso de la aplicación intravenosa de selenito de sodio en dosis altas en pacientes críticos y no se pudieron detectar efectos secundarios adversos30. Sin embargo, parece inevitable que se necesiten más investigaciones en términos de un entorno de estudio con animales antes de dar más predicciones para el uso clínico de las modificaciones de superficie de selenio/nanotubos para implantes humanos.

La nanoestructuración de superficies de titanio en forma de nanotubos ya ha llamado la atención en el pasado por mejorar la adhesión celular, el crecimiento y la diferenciación de las células formadoras de hueso31,32,33. Y los nanotubos de TiO2 ya se utilizan en la superficie de los sistemas de artroplastia total de rodilla no cementados convencionales y muestran un comportamiento osteointegrador mejorado y efectos antimicrobianos33. Peng et al. describen en su estudio que la formación de nanotubos en las superficies de titanio conduce a una disminución del crecimiento de S. epidermidis34. En nuestro estudio, los nanotubos de TiO2 (pTNT y TNT) mostraron una tendencia hacia una menor adhesión de S. epidermidis en comparación con la superficie de titanio no modificada después de 24 h de incubación. Sin embargo, la razón por la que no vimos efectos distintos en la reducción de células bacterianas podría deberse al diferente tamaño de los nanotubos en nuestro estudio (100 nm). Sin embargo, a partir de trabajos anteriores de nuestro grupo de estudio, pudimos ver una mayor formación de biopelículas con diámetros de tubo de 70 nm. Un diámetro de tubo de 100 nm mostró una disminución en la biopelícula bajo investigación SEM28.

Para mejorar el potencial antimicrobiano de las superficies de nanotubos de TiO2, se han publicado varios estudios con recubrimientos/rellenos de nanotubos adicionales35. Ya en 2007, Popat et al. pudieron mostrar una disminución del crecimiento de S. epidermidis con nanotubos de TiO2 llenos de gentamicina. No obstante, con el creciente problema de la resistencia a los antibióticos, creemos que es de vital importancia para las estrategias antimicrobianas alternativas para la IAP. Por lo tanto, se ha introducido el uso de diferentes sustratos antimicrobianos como plata o cobre como material de recubrimiento. La plata ha mostrado efectos antimicrobianos auspiciosos y se usa ampliamente en implantes de artroplastia para pacientes con un alto riesgo de desarrollar una IAP, como megaprótesis y sistemas de artroplastia de revisión26. Sin embargo, debido a la toxicidad16, no es posible un uso generalizado de la plata como agente preventivo en el reemplazo articular total primario y, por lo tanto, solo se limita a la artroplastia de revisión y la reconstrucción después de la resección del tumor. Además, debido a los efectos tóxicos, el recubrimiento de plata solo se puede aplicar en las partes del implante que no están en contacto directo con el hueso26. En nuestro estudio, se observó la mayor reducción del crecimiento bacteriano con una combinación de nanotubos dopados con plata y selenio. Especulamos que esto podría deberse al mecanismo antimicrobiano subyacente del TNT y la deposición de plata-selenio que crea un entorno de efectos antimicrobianos sinérgicos: primero, el TNT puede disminuir la adhesión bacteriana debido a sus propiedades materiales (hidrofilicidad, estructuras tubulares, rugosidad) que evitan aglomeración bacteriana mientras aumenta el crecimiento de células osteoblásticas10. Nuestro grupo de estudio pudo mostrar dos mecanismos diferentes: una formación catalítica espontánea de especies reactivas de oxígeno (ROS) en términos de H2O2 en superficies de seleniuro de plata en presencia de oxígeno debido a las propiedades de la superficie y la liberación de plata (tóxica), iones de cobre y selenio en condiciones reductoras29. Por lo tanto, creemos que nuestros hallazgos son cruciales para resaltar los mecanismos sinérgicos beneficiosos para reducir el crecimiento de células bacterianas en las superficies de titanio. Además, estos hallazgos también podrían ser útiles para reducir las concentraciones de plata a niveles tóxicos más bajos sin afectar el antimicrobiano debido a la combinación de selenio.

El uso de selenio para el recubrimiento antimicrobiano de implantes ortopédicos ya ha sido descrito por Holinka et al.27. En su estudio, los autores encontraron una disminución del crecimiento bacteriano de S. aureus y S. epidermidis con diferentes concentraciones de selenito de sodio. Además, los autores no describen una disminución en el crecimiento de las células osteoblásticas MG-63. El uso de la combinación de nanotubos de TiO2 y selenio ha sido descrito en un estudio reciente por Bilek et al.24 y sus hallazgos son congruentes con los hallazgos de nuestro estudio. Sin embargo, creemos que recubrir las superficies mediante un simple baño27 o métodos de lavado24 no garantiza necesariamente una distribución constante y equitativa de las partículas de selenio en toda la superficie. Por lo tanto, nuestro método propuesto ha demostrado ser confiable para llenar los nanotubos de titania con la cantidad deseada de selenio de forma estandarizada28. Además, un estudio reciente de nuestro grupo reveló que el efecto antibacteriano de los seleniuros (Ag2Se, Cu2Se) podría estar relacionado tanto con la liberación de iones como con la reacción indirecta de reducción de oxígeno (ORR) formando especies oxidativas de H2O229. Curiosamente, las imágenes SEM, como marcador cualitativo, mostraron una correlación considerable con los recuentos de UFC. Sin embargo, las superficies Ag2SepTNT mostraron más bacterias en las imágenes SEM que con los recuentos de CFU detectados (Fig. 4). Mirando más de cerca las imágenes SEM, encontramos que muchas colonias bacterianas ya mostraban coloides Ag2Se intracelulares (Fig. 8). Por lo tanto, especulamos que, de manera similar al efecto bactericida de la plata, Ag2Se deteriora la membrana celular e interactúa con el ADN bacteriano, lo que lleva a la muerte bacteriana.

Perfiles de imagen SEM y EDX del disco Ag2SepTNT que muestran compuestos Ag2Se dentro de las células bacterianas.

Curiosamente, con los nanotubos recubiertos de HA encontramos un recuento de CFU casi similar e incluso una mayor formación de biopelículas en comparación con el control no modificado. Creemos que esto se debe al tamaño de las partículas de HA que casi cubren el orificio de los nanotubos y, por lo tanto, podrían dificultar el efecto antimicrobiano de los nanotubos. Debido a las propiedades mecánicas de HA, es posible que la biopelícula no se desprenda tan fácilmente. Este fenómeno también fue observado y confirmado en otros estudios36,37. Además, HA cubrió el orificio de TNT, lo que podría reducir el potencial antimicrobiano del TNT. Curiosamente, cuando se depositó selenio (SepTNT-HA), aumentó el potencial antibacteriano. Por lo tanto, no fomentamos el uso combinado de nanotubos de HA y TiO2 con nuestro método propuesto. McEvoy et al. encontró resultados similares con respecto a un mayor crecimiento bacteriano en alambres de Kirschner recubiertos de HA en comparación con alambres de Ti6Al4V no recubiertos38.

De acuerdo con nuestros hallazgos, el uso de nanotubos de TiO2 dopados con selenio no tiene ninguna influencia en el crecimiento de las células osteoblásticas en comparación con las superficies regulares de titanio. Hay informes de que el crecimiento de células osteoblásticas mejora con el uso de nanotubos39,40. Sin embargo, la formación de hueso y los niveles de expresión de genes relacionados con el hueso aumentaron cuando se utilizaron diámetros de aproximadamente 70 nm. En nuestro estudio, utilizamos 100 nm a propósito para reducir la formación de biopelículas. No obstante, seguimos pensando que estos hallazgos son prometedores, ya que el crecimiento de células osteoblásticas no se ve afectado por el método de modificación de la superficie presentado aquí, al tiempo que mejora el potencial antimicrobiano. Algunos estudios incluso informan sobre una mayor adhesión de células osteoblásticas con la incorporación de selenio en la superficie de titanio41 y el uso de nanotubos de titanio, como se mencionó anteriormente, ha demostrado tener un potencial osteointegrador mejorado31,32,33. Sin embargo, dado que diferentes estudios utilizan diferentes líneas de células osteoblásticas, es posible que estos hallazgos no sean exactamente comparables entre sí. Además, según nuestros datos, la formación de nanotubos de TiO2 no reduce suficientemente la adhesión bacteriana. La adición de agentes antimicrobianos como selenio y/o plata mejora drásticamente el potencial antimicrobiano de la superficie modificada con nanotubos de TiO2.

La razón por la que el seleniuro de plata combinado con nanotubos de TiO2 muestra la mejor reducción bacteriana es compleja y podría estar relacionada con el efecto sinérgico de la plata y el selenio que promueven la formación de especies reactivas de oxígeno cuando están en un compuesto. Una liberación lenta de iones metálicos antibacterianos y la topografía de la superficie, predeterminada por la estructura de los nanotubos, contribuyen al efecto observado. La formación de H2O2 y la liberación de iones metálicos, provocada por la disolución, aumentan la permeabilidad de la membrana bacteriana y, en última instancia, deterioran el ADN bacteriano. La combinación de selenio y plata en los compuestos también podría tener el beneficio de reducir los niveles tóxicos potenciales de los iones liberados en comparación con el uso de los metales puros por separado.

En conclusión, en este estudio mostramos el potencial antimicrobiano y osteointegrador de una nueva modificación de la superficie con nanotubos de TiO2 y la posterior incorporación de agentes antimicrobianos adicionales. Esto conduce a una disminución significativa del crecimiento bacteriano en SepTNT, SepTNT-HA, AgpTNT y Ag2SepTNT y una cobertura de área significativamente mayor con células osteoblásticas MG-63 para superficies SepTNT-HA y pTNT en comparación con los controles no modificados. Estos hallazgos son de vital importancia, ya que se pudieron detectar efectos sinérgicos del selenio y la plata junto con los nanotubos de titanio, que pueden aumentar el potencial antimicrobiano de estas modificaciones superficiales. Además, la hidroxiapatita incorporada en las superficies de los nanotubos de titanio mejora el potencial osteointegrador, mientras que los efectos antibacterianos disminuyen con la adición de hidroxiapatita en las superficies de los nanotubos. Estos hallazgos son fundamentales para futuras investigaciones en términos de experimentos dinámicos in vitro e in vivo para encontrar nuevas estrategias terapéuticas para prevenir la IAP en el futuro.

La modificación electroquímica de la superficie se basa en trabajos previos del grupo de estudio y ya se describió en detalle28. Brevemente, se trituraron, pulieron, desengrasaron y limpiaron con etanol y agua desionizada discos de titanio (Ti6Al4V) con un diámetro de 10 mm y un espesor de 1 a 2 mm. La formación de nanotubos en la superficie de los discos se creó mediante anodización a un potencial constante de 30 V en una configuración de dos electrodos con los discos como ánodo y una lámina de Pt como contraelectrodo. Se han utilizado electrolitos a base de etilenglicol que contienen un 10% en volumen de agua bidestilada, NH4F 0,12 M y (NH4)NaH(PO4)4H2O 10 mM. Investigaciones anteriores han demostrado que los electrolitos a base de etilenglicol tienen el potencial de formar nanotubos uniformes28. Después de la anodización, los discos se limpiaron por ultrasonidos en etilenglicol y posteriormente se recocieron en aire (450 °C, 2 h) para transformar la(s) fase(s) de TiO2 en anatasa para completar la formación de nanotubos (TNT) y nanotubos dopados con fosfato (pTNT). en la superficie de titanio de los discos.

La deposición electroquímica de selenio (Se), plata (Ag), seleniuro de plata (Ag2Se) en el pTNT preparado se llevó a cabo en una configuración de tres electrodos. pTNT sirvió como contraelectrodo y Ag/AgCI como electrodo de referencia. El selenio se depositó mediante pulsos catódicos en electrolito Na2SeO3. Se depositó seleniuro de plata a partir de una solución que contenía NaSCN 0,5 M, AgNO3 5 mM y Na2SeO3 2,5 mM. Además, un conjunto de discos Se-pTNT y pTNT se recubrieron de manera adicional con hidroxiapatita (HA) mediante precipitación asistida electroquímicamente a partir de Ca(NO3)2 4H2O 2,5 mM y (NH4)NaH(PO4) 4H2O 1,5 mM con y sin Na2SeO328 2,5 mM. Después de las modificaciones electroquímicas de la superficie, las superficies preparadas se usaron para más pruebas in vitro:

Ti6Al4V (control), pTNT, TNT, pTNT-HA, SepTNT, SepTNT-HA, AgpTNT, Ag2SepTNT. Las concentraciones de Se y Ag en el área superficial se determinaron escaneando un área seleccionada al azar en la superficie de los discos con un detector acoplado de rayos X de dispersión de energía (EDX), TEAM OCTANE PLUS Versión 4.3. y expresado como porcentaje medio de la composición del componente (% en peso, % en peso). Se ha llevado a cabo una caracterización adicional de las propiedades y características de la superficie, incluida la composición elemental mediante mapeo EDX, la composición química mediante espectroscopia RAMAN y el perfil de liberación de iones mediante espectrometría de masas de plasma acoplado inductivamente (ICP-MS y se ha publicado previamente28,29).

En este estudio se utilizó una cepa formadora de biopelículas de Staphylococcus epidermidis (S. epidermidis) (DSM 3269; Colección Alemana de Microorganismos y Cultivos Celulares GmBH, Leibnitz, Alemania). Las bacterias se cultivaron durante la noche a 37 °C en placas de agar Columbia con sangre de carnero al 5 % (Biomerieux, Craponne, Francia) y se almacenaron a 4 °C. Para cada experimento, se inoculó la cepa en una nueva placa de agar sangre y se incubó durante la noche. De esta placa se utilizó una suspensión bacteriana en solución salina al 0,9% con una densidad óptica de McFarland 0,5 y luego se diluyó 1:100 en caldo Mueller-Hinton (Sigma-Aldrich, St. Louis, Missuouri) (aproximadamente 1 × 106 células/ ml) para experimentos de recuento de células bacterianas y formación de biopelículas.

Los discos de cada recubrimiento se usaron para el experimento dos veces por triplicado. Los discos se colocaron en una placa de 24 pocillos y se transfirió 1 ml de la suspensión de células bacterianas descrita en cada pocillo. Las placas de pocillos se sellaron y se incubaron a 37 °C en aire ambiente durante 24 h. Después de la incubación, los discos se lavaron dos veces con PBS (Sigma-Aldrich, St. Louis, Missuouri). Posteriormente los discos fueron sonicados en PBS (Bandelin Sonorex Super RK 100) a una intensidad de 44 kHz durante 10 min. El líquido de sonicación resultante (10 ml) se sembró en alícuotas de 1 ml en placas de agar Columbia y se incubó nuevamente a 37 °C en aire ambiente durante 24 h. Después de la incubación, se tomaron fotografías de las placas y se contaron las unidades formadoras de colonias (CFU) por mililitro (CFU/mL) con el software ImageJ (versión 2.1.0). Se incubó un triplicado adicional de discos con suspensión bacteriana en placas de 24 pocillos a 37 °C en aire ambiente durante 24 h. Después de la incubación, los discos se lavaron cuidadosamente en PBS y se fijaron con metanol. Posteriormente, las superficies de los discos se analizaron nuevamente mediante SEM para visualizar la adherencia bacteriana (Fig. 1).

Los discos se incubaron con suspensión bacteriana como se describe anteriormente. Después de 24 h de incubación a 37 °C, los discos se lavaron cuidadosamente dos veces en agua destilada. Se añadió una solución de 3 μl de SYTO 9 a 1 ml de agua esterilizada por filtración. Los discos se lavaron suavemente en PBS (3 ml, tres veces) y se añadieron 750 μl de solución de tinción al disco. La placa de tinción se cubrió y las muestras se incubaron durante 20-30 min a temperatura ambiente protegidas de la luz. Después de la incubación, las muestras se enjuagaron nuevamente con agua esterilizada por filtración y se observaron con un microscopio de fluorescencia (Zeiss Axioplan 2 Fluorescence Phasecontrast Microscope, Carl Zeiss, Jena, Alemania) con un aumento de 10x.

Discos adicionales (por triplicado) se incubaron nuevamente con suspensión bacteriana, luego se fijaron con metanol y se tiñeron con cristal violeta al 1 % (Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri) durante 15 min, se lavaron nuevamente con agua destilada y se secaron al aire. Posteriormente, se tomaron fotografías de los discos en condiciones estandarizadas (fondo, iluminación, distancia al lente) y se calculó el área cubierta con el software ImageJ (versión 2.1.0). La tinción se llevó a cabo dos veces por triplicado para cada recubrimiento.

Para detectar cualquier influencia en el crecimiento de células osteoblásticas, se cultivaron células MG-63 de la línea de células osteoblásticas adquiridas de American Type Culture Collection (ATCC, EE. UU., VA, CRL-1427) en frascos de cultivo de tejidos de 25 cm2 (Falcon; Thermo Fisher Scientific, Slangerup , Dinamarca) en Alpha-MEM (PAN-Biotech, Aidenbach, Alemania) con 10% FCS en atmósfera humidificada con 5% CO2 e incubado a 37 °C. Aproximadamente al 70 % de confluencia, las células se separaron con tripsina/EDTA (Gibco ™, Thermo Fisher Scientific, Slangerup, Dinamarca) y se diluyeron en Alpha-MEM + FCS para obtener la concentración final de 1,5 × 105 células/ml. Se inoculó 1 ml de la solución en cada disco de titanio y se incubó durante 24 h en atmósfera humidificada a 37 °C y 5% de CO2. Después de la incubación, los discos se lavaron con agua destilada y se fijaron con metanol durante 10 min. Los discos se lavaron en agua destilada, se tiñeron con cristal violeta durante 15 min, se lavaron nuevamente con agua destilada y se secaron al aire. Posteriormente, se tomaron fotografías de los discos en condiciones estandarizadas (fondo, iluminación, distancia al lente) y se calculó el área cubierta con el software ImageJ (versión 2.1.0). La tinción se llevó a cabo dos veces por triplicado para cada recubrimiento.

Los resultados se presentan como media y desviación estándar (DE). Las variables numéricas (UFC/ml, área cubierta en %) se analizaron mediante un análisis de varianza de una vía (ANOVA) y se compararon mediante una prueba post-hoc de Tukey-HSD. Los resultados se consideraron estadísticamente significativos con un valor de p < 0,05. El análisis estadístico se realizó con SPSS 26.0.0.1 (SPSS Inc. IBM, Chicago, EE. UU.).

Todos los autores declaran no tener ningún interés competitivo relacionado con este estudio. RW recibe regalías de DePuy Synthes (Varsovia, IN, EE. UU.) y Stryker (Kalamazoo, MI, EE. UU.) fuera del trabajo presentado.

Cada autor certifica que su institución aprobó el protocolo de estudio para esta investigación y que todas las investigaciones se realizaron de conformidad con los principios éticos de investigación.

Todos los datos generados o analizados durante este estudio se incluyen en este artículo publicado y en sus archivos de información complementaria.

Kurtz, S., Ong, K., Lau, E., Mowat, F. & Halpern, M. Proyecciones de artroplastia primaria y de revisión de cadera y rodilla en los Estados Unidos desde 2005 hasta 2030. J. Bone Joint Surg. Soy. 89, 780–785 (2007).

Artículo PubMed Google Académico

Kurtz, SM et al. ¿Estamos ganando o perdiendo la batalla con la infección de la articulación periprotésica? Tendencias en la infección de la articulación periprotésica y el riesgo de mortalidad para la población de Medicare. J. Artroplastia 33, 3238–3245 (2018).

Artículo PubMed Google Académico

Kurtz, S., Lau, E., Watson, H., Schmier, J. & Parvizi, J. Carga económica de la infección articular periprotésica en los Estados Unidos. J. Artroplastia 27, 61–5.e1 (2012).

Artículo PubMed Google Académico

Karczewski, D. et al. Un algoritmo interdisciplinario estandarizado para el tratamiento de infecciones de prótesis articulares. Articulación ósea J. 101-B, 132–139 (2019).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Middleton, R., Khan, T. & Alvand, A. Actualización sobre el diagnóstico y manejo de la infección de prótesis articular en artroplastia de cadera y rodilla. Hueso Jt. 360(8), 5–13 (2019).

Google Académico

Zmistowski, B., Karam, JA, Durinka, JB, Casper, DS y Parvizi, J. La infección articular periprotésica aumenta el riesgo de mortalidad en un año. J. Hueso Jt. Cirugía-Am. 95, 2177–2184 (2013).

Artículo Google Académico

Corona, PS et al. Susceptibilidad a los antibióticos en infecciones crónicas por artroplastia articular grampositivas: aumento de la tasa de resistencia a los aminoglucósidos en pacientes con uso previo de espaciadores de cemento impregnados con aminoglucósidos. J. Artroplastia 29, 1617–1621 (2014).

Artículo PubMed Google Académico

Brammer, KS, Frandsen, CJ & Jin, S. Nanotubos de TiO2 para la regeneración ósea. Tendencias Biotecnología. 30, 315–322 (2012).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Tang, P. et al. Efecto de la superficie superhidrofóbica de titanio sobre la adhesión de Staphylococcus aureus. J. Nanomater. 2011, 178921 (2011).

Artículo CAS Google Académico

Chouirfa, H., Bouloussa, H., Migonney, V. & Falentin-Daudré, C. Revisión de técnicas de modificación de superficies de titanio y recubrimientos para aplicaciones antibacterianas. Acta Biomater. 83, 37–54 (2019).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Ercan, B., Taylor, E., Alpaslan, E. & Webster, TJ El diámetro de los nanotubos de titanio influye en la eficacia antibacteriana. Nanotecnología 22, 295102 (2011).

Artículo PubMed CAS Google Académico

Chen, Y. et al. Los nanoclusters de plata anfifílicos muestran una interacción nano-bio activa con una actividad antibacteriana convincente contra las bacterias multirresistentes. NPG Asia Mater. 12, 56 (2020).

Artículo CAS Google Académico

Zhang, Y. et al. Revestimiento de implante de titanio antibacteriano cargado de plata mejorado con un efecto jerárquico novedoso. J. Biomater. aplicación 32, 1289–1299 (2018).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Albers, CE, Hofstetter, W., Siebenrock, KA, Landmann, R. & Klenke, FM Citotoxicidad in vitro de nanopartículas de plata en osteoblastos y osteoclastos en concentraciones antibacterianas. Nanotoxicología 7, 30–36 (2013).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Godoy-Gallardo, M. et al. La deposición de plata sobre la superficie de titanio mediante un proceso de anodización electroquímica reduce la adhesión bacteriana de Streptococcus sanguinis y Lactobacillus salivarius. clin. Implantes Orales Res. 26, 1170–1179 (2015).

Artículo PubMed Google Académico

Geng, Z. et al. Incorporación de plata y estroncio en el recubrimiento de hidroxiapatita sobre la superficie de titanio para mejorar las propiedades antibacterianas y biológicas. Mate. ciencia Ing. C. Mate. Biol. aplicación 71, 852–861 (2017).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Jin, G. et al. Actividad osteogénica y efecto antibacteriano del titanio implantado con iones de zinc. Surf de coloides. B. Biointerfaces 117, 158–165 (2014).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Medina, CD, Mi, G. & Webster, TJ Síntesis y caracterización de nanopartículas de selenio biogénicas con propiedades antimicrobianas elaboradas por Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (MRSA), Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa. J. Biomédica. Mate. Res. A 106, 1400–1412 (2018).

Artículo CAS Google Académico

Tran, PA et al. Nanopartículas de selenio como recubrimientos de implantes antiinfecciosos para ortopedia de trauma contra Staphylococcus aureus y epidermidis resistentes a la meticilina: evaluación in vitro e in vivo. En t. J. Nanomedicina 14, 4613–4624 (2019).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Holinka, J., Pilz, M., Kubista, B., Presterl, E. y Windhager, R. Efectos del recubrimiento de selenio de superficies de implantes ortopédicos sobre la adherencia bacteriana y el crecimiento de células osteoblásticas. Articulación ósea J. 95-B, 678–82 (2013).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Liu, W. et al. Las nanopartículas de selenio incorporadas en los nanotubos de titania inhiben el crecimiento bacteriano y la proliferación de macrófagos. Nanoescala 8, 15783–15794 (2016).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Nie, L., Hou, M., Wang, T., Sun, M. & Hou, R. Fosfato de calcio bifásico dopado con selenio nanoestructurado con incorporación in situ de plata para aplicaciones antibacterianas. ciencia Rep. 10, 13738 (2020).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Huang, Y. et al. La construcción de una estructura jerárquica sobre sustrato de Ti con actividad osteogénica superior y capacidad antibacteriana intrínseca. ciencia Rep. 4, 6172 (2015).

Artículo CAS Google Académico

Bilek, O., Fohlerova, Z. & Hubalek, J. Propiedades antibacterianas y anticancerígenas mejoradas de la película de nanotubos de TiO2 decorada con Se-NP. PLoS ONE 14, e0214066 (2019).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Actis, L., Srinivasan, A., Lopez-Ribot, JL, Ramasubramanian, AK & Ong, JL Efecto de la geometría de las nanopartículas de plata sobre el Staphylococcus aureus sensible y resistente a la meticilina y la viabilidad de los osteoblastos. J.Mater. ciencia Mate. Medicina. 26, 215 (2015).

Artículo PubMed CAS Google Académico

Diez-Escudero, A. & Hailer, NP El papel del recubrimiento de plata para componentes de artroplastia. Articulación ósea J. 103-B, 423–429 (2021).

Artículo PubMed Google Académico

Artículo CAS PubMed Google Académico

Sun, J. et al. Modificación superficial de aleación Ti6Al4V para implantes mediante anodización y electrodeposición. OBJETIVOS Mater. ciencia 6, 713–729 (2019).

Artículo CAS Google Académico

Sun, J. et al. Investigación electroquímica para comprender el efecto bactericida de Cu2Se y Ag2Se para aplicaciones biomédicas. Aplicación J. electroquímica 52, 1–15 (2022).

Artículo CAS Google Académico

Sakr, Y. et al. Suplementación adyuvante de selenio en forma de selenito de sodio en pacientes postoperatorios en estado crítico con sepsis grave. crítico Cuidado 18, R68 (2014).

Artículo PubMed PubMed Central Google Académico

Popat, KC, Eltgroth, M., Latempa, TJ, Grimes, CA y Desai, TA Reducción de la adhesión de la epidermis de Staphylococcus y aumento de la funcionalidad de los osteoblastos en nanotubos de titania cargados con antibióticos. Biomateriales 28, 4880–4888 (2007).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Brammer, KS y col. Funcionalidad de formación de hueso mejorada en la superficie de nanotubos de TiO(2) de diámetro controlado. Acta Biomater. 5, 3215–3223 (2009).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Su, EP et al. Efectos de los nanotubos de titanio sobre la osteointegración, la diferenciación celular, la mineralización y las propiedades antibacterianas de las superficies de los implantes ortopédicos. Articulación ósea J. 100-B, 9–16 (2018).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Peng, Z. et al. Efectos duales y mecanismo de las matrices de nanotubos de TiO2 para reducir la colonización bacteriana y mejorar la adhesión celular C3H10T1/2. En t. J. Nanomed. 8, 3093 (2013).

Google Académico

Getzlaf, M. et al. Estrategias antimicrobianas multidisciplinarias para mejorar los implantes ortopédicos para prevenir infecciones de prótesis articulares en cadera y rodilla. J. Orthop. Res. 34, 1158 (2016).

Artículo Google Académico

Guerreiro-Tanomaru, JM et al. Análisis comparativo de la formación de biopelículas de Enterococcus faecalis en diferentes sustratos. J. Endod. 39, 346–350 (2013).

Artículo PubMed Google Académico

Jaffar, N., Miyazaki, T. y Maeda, T. Formación de biopelículas de patógenos periodontales en superficies de hidroxiapatita: implicaciones para el daño del periodonto. J. Biomédica. Mate. Res. A 104, 2873–2880 (2016).

Artículo CAS PubMed Google Académico

McEvoy, J., Martin, P., Khaleel, A. & Dissanayeke, S. Los alambres Kirschner de titanio resisten las biopelículas mejor que los alambres de acero inoxidable y recubiertos de hidroxiapatita: un estudio in vitro. Estrateg. reconstrucción de miembro traumatizado 14, 10058 (2019).

Google Académico

Li, Y. et al. Oseointegración mejorada y acción antibacteriana de sustratos de titanio recubiertos con nanotubos de titania cargados de zinc: estudios in vitro e in vivo. J. Biomédica. Mate. Res. Parte A 102, 3939–3950 (2014).

Artículo ADS CAS Google Académico

Wang, N. et al. Efectos de los nanotubos de TiO2 de diferentes diámetros sobre la expresión génica y la osteointegración de implantes en minipigs. Biomateriales 32, 6900–6911 (2011).

Artículo CAS PubMed Google Académico

Tran, PA, Sarin, L., Hurt, RH y Webster, TJ Superficies de titanio con nanoclusters de selenio adherentes como material ortopédico novedoso contra el cáncer. J. Biomédica. Mate. Res. A 93, 1417-1428 (2010).

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Kevin Staats, Magdalena Pilz, Reinhard Windhager y Johannes Holinka

Centro de Competencia de Tecnología Electroquímica de Superficies (CEST GmbH), Wiener Neustadt, Austria

Jie Sun y Tzvetanka Boiadjieva-Scherzer

Instituto de Tecnología Química y Analítica, Universidad Técnica de Viena, Viena, Austria

Hermann Kronberger

Departamento de Medicina Interna I, División de Enfermedades Infecciosas y Medicina Tropical, Universidad Médica de Viena, Viena, Austria

Selma Tobudic

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Correspondencia a Kevin Staats.

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Recibido: 24 enero 2022

Aceptado: 05 abril 2022

Publicado: 18 mayo 2022

DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-022-11804-6

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